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液氮冷冻研磨机提取RNA步骤探讨


   液氮冷冻研磨机采用电磁撞子研磨技术,将装有样品的密闭容器浸入液氮,在超低温环境下,利用电磁驱动钢制撞子往复撞击样品,快速彻底地粉碎样品。独特的研磨方式相比传统研磨,研磨时间更短,研磨样品更为精细。
液氮冷冻研磨机的设计人性化、安全高效、耐用、操作简单、准确性和重现性好、避免样品间的交叉污染,适应不同客户的各种需求,是公认的“研磨手段”,广泛应用于生物化学、动植物、医学、矿物学、材料科学等领域。
液氮冷冻研磨提取RNA该如何进行?一起来看看:
1.用75%酒精对实验操作台、移液枪、枪头盒、管架进行消毒。
2.取出-80℃冰箱保存的组织块,放于用液氮预冷过的研钵中,敲碎一小块组织,其余放回冻存管。
3.加入液氮,先轻轻敲碎组织到最小块,再研磨成粉末,直到看不到组织块。
4.加入液氮使粉末凝聚成团,马上用药勺把粉末转移到2.0ml EP管中。
5.待液氮挥发干后,加入1ml Trizol裂解液,用1ml移液器将细胞吹散开,保证细胞裂解充分,必要时可借助水平振荡器混匀。
6.4℃离心机12000rpm离心5分钟,弃沉淀。
7.加入CHCl3,比例200ul CHCl3/ml Trizol,颠倒混匀,室温放置15分钟。
8.于4℃离心机12000g离心15分钟。取上清液,注意吸取上清是无触碰到中间层或下层。
9.取上清液,注意吸取上清是无触碰到中间层或下层。
10.加入等体积异丙醇,-20℃沉淀1小时。
11.于4℃离心机12000g离心10分钟。
12.弃上清,加入1ml 75%酒精漂洗沉淀,于4℃离心机800g离心5分钟。必要时可重复酒精洗涤。
13.弃上清,可选择再次离心去除残留的乙醇,沉淀在安全柜内晾干,切忌过干,只需目测乙醇挥发干即可。
14.根据沉淀的大小,使用无RNA酶的水将RNA沉淀充分溶解。选择溶解沉淀的体积,一般为30-100ul。测RNA浓度,此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之间。
15.电泳检测RNA完整性,0.5XTBE Buffer,110V电泳30分钟。
16.最后将沉淀保存在-80℃低温冰箱。
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