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小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物

近期的组织研磨和样品处理分享、讨论,我们邀请到了实验动物监测所老师给大家分享,内容是——小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物,研磨使用的仪器是洛尚(LAWSON)组织研磨仪

实例1:加裂解液直接匀浆

1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块;

2、在离心管中加入氧化锆珠数颗(一次性使用);

3、先加入Trizol(不建议加入太多 Trizol,液体体积过大影响匀浆效果),盖好管盖,装入洛尚(LAWSON)组织研磨仪适配器中,安装上机。

4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速,研磨时间为2~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷);

5、再加入适量Trizol至总体积;

6、后面步骤按Trizol说明进行。

实例2:先匀浆,再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提,本protocol适用提取小鼠组织中的病毒的核酸

1、取适量组织装入离心管,组织尽量剪碎成小块,样品量较多时使用大离心管;

2、在离心管中加入氧化锆珠数颗,使用大离心管时,可以将氧化锆珠数量增加;

3、加入适量的灭菌PBS或生理盐水,总体积为离心管单管体积的1/3~1/2为好,盖好管盖,装入洛尚(LAWSON)组织研磨仪适配器中,安装上机(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷)。

4、洛尚(LAWSON)组织研磨仪参数设置为一定转速,研磨时间为1~5min(不同组织研磨时间不同,脑1min,肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min,可能更长,中间应停顿1~2次防止温度过高),若研磨不充分,可以继续研磨到充分为止;

5、一定温度、转速,离心数分钟;

6、取上清液按照试剂盒说明书进行后续提取步骤。 实验1中,我们之前试过一齐加1ml的Trizol,可能是体积过大,反而匀浆效果不好,所以就改成先加一部分裂解先匀浆,然后再补齐1ml体积。

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